Apolo

Atividade

124664 - Módulo Único: Hands-On com Experiência Laboratorial

Período da turma:

25/08/2025 a 30/08/2025

Selecione um horário para exibir no calendário:

Descrição:

Dia 1 - Fundamentos de CRISPR: Preparação para o Laboratório
Revisão, no laboratório, sobre os princípios básicos e aplicações. Re-discutir sobre ética e regulamentações associadas à edição genética. Atividade prática: preparação de reagentes e treinamento no cultivo celular.

Dia 2 - Guiando a Precisão: Design de RNA-guias e Edição Gênica
Princípios de design de guias CRISPR para direcionar a edição genética, com revisão das técnicas de entrega de CRISPR-Cas9 em células e organismos. Atividade prática: design de RNAs-guia para o gene KLK5.

Dia 3 - Passo a Passo no Laboratório: Protocolos e Técnicas de Clonagem
Revisão dos protocolos de laboratório para edição de genes com CRISPR-Cas9.
Atividade prática: clonagem dos RNAs-guia e técnicas de análise molecular para verificar a eficácia da clonagem, em plasmídio lentiviral CRISPR-Cas9.

Dia 4 - Explorando Casos Práticos: Estudo de Caso e Transdução em Linhagens Celulares Específicas
Revisão das plicações avançadas da tecnologia CRISPR em pesquisa biomédica, agrícola e industrial. Estudos de caso: exemplos de pesquisas no laboratório utilizando CRISPR-Cas9 (Alves MG, et al., 2021).
Atividade Prática: Transdução dos plasmídio clonado (ver dia 3) em linhagem celular de carcinoma epidermóide de língua.

Dia 5 - Selecionando Colônias Celulares Positivas para CRISPR-Cas: Técnicas e Estratégias
Atividade Prática: os participantes realizam uma série de experimentos para seleção das colônias positivas para o nocaute através da técnica CRISPR-Cas9.

Dia 6 - Avaliação final: os participantes demonstram suas habilidades em design de guias, preparação de amostras, execução de experimentos e análise de resultados.

1. Barrangou, R., et al. (2007). CRISPR provides acquired resistance against viruses in prokaryotes. Science 315, 1709–1712.
2. Bolotin, A., et al. (2005). Clustered regularly interspaced short palindrome repeats (CRISPRs) have spacers of extrachromosomal origin. Microbiology 151, 2551–2561.
3. Brouns, S.J., et al. (2008) Small CRISPR RNAs guide antiviral defense in prokaryotes. Science 321, 960-964.
4. Cong, L., et al. (2013). Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems. Science 339, 819–823.
5. Deltcheva, E., et al. (2011). CRISPR RNA maturation by trans-encoded small RNA and host factor RNase III. Nature 471, 602–607.
6. Gasiunas, G., et al. (2012). Cas9–crRNA ribonucleoprotein complex mediates specific DNA cleavage for adaptive immunity in bacteria. Pnas 109, E2579–E2586.
7. Hale, C.R., et al. (2009). RNA-Guided RNA Cleavage by a CRISPR RNA-Cas Protein Complex. Cell 139, 945–956.
8. Jinek, M., et al. (2012). A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity. Science 337, 816–821.
9. Makarova, K.S., et al. (2006). A putative RNA-interference-based immune system in prokaryotes: computational analysis of the predicted enzymatic machinery, functional analogies with eukaryotic RNAi, and hypothetical mechanisms of action. Biology Direct 2006, 1:7.
10. Mali, P., et al. (2013). RNA-guided human genome engineering via Cas9. Science 339, 823–826.
11. Marraffini, L.A., and Sontheimer, E.J. (2008). CRISPR interference limits horizontal gene transfer in staphylococci by targeting DNA. Science 322, 1843–1845.
12. Mojica, F.J.M., et al. (2005). Intervening Sequences of Regularly Spaced Prokaryotic Repeats Derive from Foreign Genetic Elements. J Mol Evol 60, 174–182.
13. Pourcel, C.,et al. (2005). CRISPR elements in Yersinia pestis acquire new repeats by preferential uptake of bacteriophage DNA, and provide additional tools for evolutionary studies. Microbiology 151, 653–663.
14. Sapranauskas, R. et al. (2011). The Streptococcus thermophilus CRISPR/Cas system provides immunity in Escherichia coli. Nucl. Acids Res. 39, gkr606–gkr9282.

Carga Horária:

60 horas

Tipo:

Obrigatória

Vagas oferecidas:

Ministrantes:

Katiuchia Uzzun Sales
Nerry Tatiana Cecilio

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